摘要：为了对石油污染的土壤进行生物修复，从大庆油田油泥和油田污水中富集培养、分离得到52株菌，通过对各菌株的排油活性及表面张力实验，优选出菌株B，。。、B。。。、B矾和C∞，它们产生的表面活性剂的表面张力较低，并且表面活性稳定．对纯化的表面活性剂分析表明，表面活性剂的主要成分为脂肽类(LiPOpeptide)、鼠李糖脂(Rhamnolipid)、槐糖脂(Sophrolipids)及甘油酯类(Glyceride)化合物．用这4株菌的发酵液进行了油泥处理实验，72 h后石油去除率平均达70％ 以上．与对照样品相比，石油去除率提高到大约7～9倍．
    关键词：除油；微生物分离；排油活性；生物表面活性剂；油泥处理
    中图分类号：X 172 文献标识码：A 文章编号：0367—6234(2007)04—0586—03
    生物表面活性剂是天然表面活性剂的一种，主要是指微生物在一定培养条件下产生的一些代谢产物，分子结构具有严格的亲水和疏水基团，它们除具有降低表面张力、稳定乳化液等特性外，还具有无毒、自然生物降解、生态安全及高表面活性和生理活性等优点 ．
    生物表面活性剂在石油的生物降粘、提高原油采收率、重油污染土壤的生物修复等石油工业和环境工程领域得到广泛应用，并引起各国学者们越来越多的关注．
    本研究在油泥和油田污水中筛选出产生生物表面活性剂的除油土著微生物，对除油微生物的生理生化特性进行了分析，制备出生物表面活性剂，并且利用富含表面活性剂的发酵液进行了油泥处理室内实验，研究结果可为大规模的油田污泥处理及石油回收提供借鉴．
    1 材料与方法
    1．1 培养基
    细菌富集培养基(1 L溶液)：硫酸铵1 g，氯化钾0．11 g，硫酸亚铁2．8×10～g，磷酸二氢钾0．34 g，磷酸氢二钾0．44 g，硫酸镁0．05 g，酵母膏0．05 g，微量元素液5ml，正烷烃2 mL，pH7～7．5；酵母和霉菌富集培养基(1 L溶液)：硫酸铵0．6 g，磷酸二氢钾0．3 g，磷酸氢二钠0．2 g，硫酸镁0．08 g，硫酸亚铁0．001g，氯化钙0．01 g，酵母膏0．05 g，微量元素溶液0．5 mL，正烷烃4 mL，pH6．
    1．2 菌株富集和分离方法
    菌源为大庆油田油水分离系统中三相分离器内的油泥及大庆油田污水处理厂石油废水．称取油泥l0 g，加入90 mL无菌水，摇床上振荡2 h．取上清液及石油废水10 mL接种到装有90 mL富集培养基的摇瓶中，于28℃、220 r／min的恒温摇床中振荡培养3 d，以此摇瓶中的培养菌液作为菌种，在同样条件下进行二次转接培养．将二次培养的菌液做适当稀释，将不同浓度的稀释液分别涂布在普通培养基中，选择生长较好的菌株进一步在平板上划线纯化，挑取单菌落保存在
斜面培养基上．将斜面保存的菌株接种在摇瓶培养液中，28 oC、220 r／min振荡培养3～5 d，培养基同富集培养基．
   1．3 菌株的筛选、鉴定及生物表面活性剂的制备分析方法
    生物表面活性剂菌株的筛选依据排油活性实验结果，排油性试验时，取一培养皿，加水后再加0．1 mL橄榄油，在油膜中心加摇瓶发酵液，中心油膜被挤向四周形成一圆圈，圆圈直径与表面活性剂含量和活性成正比，测量圆圈直径大小，直径>3 cm的菌株保留做进一步研究l4]．表面张力测定方法为圆环法，采用山东淄博科森公司的Auto— tensiometer ZL一2型表面张力测定仪．菌株鉴定根据文献 I6 进行．
    制备生物表面活性剂时，取培养后菌株发酵液，8000 r／min离心20 min除菌体" ；上清液用浓HC1调pH至2．0，出现絮状沉淀，4℃静止过夜，10000 r／min离心30 min收集沉淀；用 pH2．0的酸水洗涤一次，随后将该沉淀溶于NaOH溶液，使pH为7．0，冷冻干燥，得浅褐色疏松状固体的表面活性剂粗品．将粗品置NH C1 中抽提，后减压蒸干，稀NaOH溶液溶解，形成多泡液体；再用Whatman No．4滤纸过滤，滤液再次加HC1调pH至2．0，将得到的沉淀离心，真空干燥去除残留水分，即得成品．生物表面活性剂主要成分通过凝胶电泳、纸层析、薄层色谱和气相色谱法进行分析．
    1．4 生物表面活性剂处理油泥室内实验方法
    称取油泥l0 g，测定含油量，然后加入离心(8000 r／min，20 min)后的菌株B381、B101、B C43发酵液100 mL，在25～28℃下振荡，分别在24、48、72 h时取样，离心，测定泥渣含油量，每菌株做3次重复；用培养基做空白对照(CK)．
    2 结果与讨论
    2．1 生物表面活性剂成份分析及产生菌的分离与筛选
    从多达100份的大庆油田油泥、石油污水样品中，经过富集培养、平板分离，获得52株菌．摇瓶培养，发酵液离心(8000 r／min，10 min)，取上清液进行排油活性测定，圆圈直径>3 cm的菌株有l0株．经过多次重复摇瓶培养，圆环法对发酵液的表面张力测定，表面活性保持稳定，表面张力